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Radoslaw Bombera

Développement de biopuces dédiées au tri d'échantillons cellulaires

Publié le 5 décembre 2011


Thèse soutenue le 05 décembre 2011 pour obtenir le grade de docteur de l'Université Joseph-Fourier de Grenoble - Spécialité : Chimie - Biologie

Résumé :
Le présent travail de thèse repose sur la conception d'un système miniaturisé de type biopuce capable d'assurer la capture et le relargage contrôlé de différentes populations des cellules sanguines (e.g. lymphocytes). Ce projet a pour objectif la construction d'un outil potentiel de recherche dans le domaine de l'immunologie ainsi que du diagnostic qui permettrait non seulement de réaliser des essais à partir d'une faible quantité d'échantillon, mais aussi de réduire le temps d'analyse. L'approche consiste plus précisément en la fabrication d'une matrice d'oligonucléotides et l'immobilisation de cellules via une molécule hybride composée d'un anticorps IgG couplé à une séquence d'oligonucléotide complémentaire. La synthèse du produit conjugué est mise en place et conduit à l'assemblage fonctionnel sur biopuce. Une fois les cellules spécifiquement capturées sur la surface, deux voies de rélargage contrôlé sont explorées. Ainsi, les lymphocytes sont libérées de façon contrôlée et séquentielle par clivage enzymatique d'ADN ou alors par désorption physique possible grâce au chauffage localisé. La détection se fait en temps réel par l'imagerie de la résonance plasmonique de surface (Surface Plasmon Resonance Imaging, SPRi) qui présente l'avantage de pouvoir suivre les phénomènes biomoléculaires en absence de marquage et d'apporter une réponse simultanée d'un échantillon biologique sur un grand nombre des sondes. Accessoirement, une approche instrumentale particulière nous permet d'observer les étapes de capture/relargage par microscopie optique classique. La construction de la biopuce permet également l'élargissement à plusieurs cibles et ouvre ainsi la voie à de nombreuses possibilités d'exploration en termes d'application pour l'analyse d'échantillons biologiques plus complexes tels que du sang.

Jury :
Président : M. Éric Defrancq
Rapporteur : Mme Carole Chaix
Rapporteur : M. Pascal Colpo
Membre : M. Ali Laayoun
Membre : M. Thierry Livache
Membre : M. Yoann Roupioz
Directeur de thèse : M. Thierry Livache
Co-directeur de thèse : M. Yoann Roupioz

Mots clés :
Enzyme de restriction, Biomolécules conjuguées, Effet phothothermique, Imagerie SPR, Tri cellulaire, Biopuce

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