Thèse soutenue le 17 novembre 2005 pour obtenir le grade de docteur de l'Université Joseph-Fourier de Grenoble - Spécialité : Biotechnologie, Santé et Management
Résumé : Le but de cette thèse est de concevoir une puce à sucres, compatible avec un système optique d'imagerie en résonance des plasmons de surface (SPRi), afin d'analyser simultanément de multiples interactions protéine/oligosaccharide en temps réel. La réalisation d'un système modèle, ayant comme sucre sonde, l'héparine, est proposée. La modification du sucre par un pyrrole permet de le déposer sur une surface d'or par électrocopolymérisation. Cette chimie nécessite la construction de molécules « pyrrole - bras espaceurs » compatibles avec les propriétés des sucres utilisés. La puce utilisable en SPRi est ensuite fabriquée par électrocopolymérisations successives. Ces plots formés peuvent être caractérisés par MEB et par AFM. Des expériences préliminaires utilisant des traceurs fluorescents ont permis de valider le système ainsi que la chimie proposée ; la fluorescence observée est spécifique de l'interaction biologique grâce à la présence de négatifs. Les études d'interactions biologiques suivies par SPRi ont alors été réalisées ; la sensibilité de l'interaction est confirmée. Grâce à l'acquisition en temps réel des interactions, les cinétiques d'association et de dissociation du complexe oligosaccharide/protéine sont observées puis optimisées. De plus, les puces fabriquées sont régénérables mais aussi réutilisables sur plusieurs mois, ce qui permet l'étude des paramètres chimiques et biologiques. Cette approche est appliquée finalement à plusieurs problématiques biologiques.
Jury :Rapporteur : M. Malcolm Buckle
Rapporteur : M. Neso Sojic
Examinateur : M. Marco Mascini
Examinateur : M. Alain Favier
Examinateur : M. Hugues Lortat-Jacob
invité industriel : Mme Roberta Collino
Directeur de thèse : M. Thierry Livache
Mots clés : oligosaccharide, interactions protéine, oligosaccharides, polypyrrole, électrocopolymérisation, Imagerie SPR, Résonance des plasmons de surface
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