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Camille Daniel

Biopuce à aptamères anti-thrombine : exploration d'une technique alternative de détection

Publié le 21 octobre 2013



Thèse soutenue le 21 octobre 2013 pour obtenir le grade de docteur de l'Université Joseph-Fourier de Grenoble - Spécialité : Physique pour les Sciences du Vivant

Résumé :
Du fait de leur haute stabilité et bas coût de production, les aptamères suscitent un intérêt croissant, depuis près de 20 ans, dans le design de biocapteurs en tant qu'élément de reconnaissance idéal. Le but de ce travail de thèse est de démontrer l'intérêt et la pertinence d'un outil tel qu'une biopuce à aptamères, associant les avantages des sondes aptamères à ceux d'une détection par SPRi (Surface Plasmon Resonance imaging), permettant une détection sans marquage et en temps réel d'interactions moléculaires. Dans ce but, deux aptamères anti-thrombine (APT1 = 5′- GGT-TGG-TGT-GGT-TGG -3′ et APT2 = 5′-AGT-CCG-TGG-TAG-GGG-AGG-TTG-GGG-TGA-CT-3′) ont été choisis comme objets d'étude modèles. Ce choix a permis d'orienter différents axes de recherche : utilisés indépendamment comme sondes lors de l'élaboration de notre biopuce, ils ont tout d'abord permis de réaliser une détection cinétique optimisée de la thrombine, avec des performances remarquables pour une détection de ce type, ainsi que le calcul de constantes de dissociation en solution et à la surface des biopuces. Mais au-delà d'un simple biocapteur, la biopuce a également pu être utilisée comme véritable plateforme d'étude de la thrombine et de ses interactions, au sein de structures plus complexes telles que la structure « sandwich » entre les deux aptamères, ou d'autres interactions impliquant la thrombine en tant qu'acteur de la cascade de coagulation (inhibition de la thrombine par l'antithrombine III et le cofacteur II de l'héparine, transformation de la prothrombine au sein du complexe prothrombinase).

Jury :
Président : M. Éric Peyrin
Rapporteur : Mme Maryam Tabrizian
Rapporteur : Mme Maria Minunni
Examinateur : Mme Claude Nogues
Directeur de thèse : M. Arnaud Buhot
Co-directeur de thèse : M. Yoann Roupioz

Mots clés :
SPR, Aptamère, Biopuce, Thrombine

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